液相色譜的方法開發(fā)（Method Develpment）不是一件容易的事情。該用什么流動相，什么色譜柱，梯度怎么設(shè)置，用什么溫度，什么波長等等，對于剛?cè)胄械耐瑢W(xué)，是一件非常令人頭疼的事情。
 

那么，有沒有對于大多數(shù)小分子有機化合物都通用的液相方法 （Generic HPLC Method）呢?

理想是豐滿的，但這一次現(xiàn)實卻不是骨感的。

雖然我們找不到一個百分百放之四海皆可的液相方法，但是我們卻找到了一個對于制藥行業(yè)絕大多數(shù)小分子分析都可以作為起始條件的“通用”方法，在此基礎(chǔ)上根據(jù)實際出峰情況做一些小調(diào)整，方法開始基本在一兩個小時內(nèi)就可以搞定。

該方法是由Michael W. Dong 2016年LCGC雜志上發(fā)表，我們得到作者的授權(quán)，把文章的內(nèi)容作了摘要分享給大家。

• 選擇表面多孔顆粒柱（superficially porous particles，SPP）的原因，是它能夠提供相比其他同類色譜柱更高的柱效，以及對于堿性化合物更小的拖尾。

• 同時選擇2.7um的粒徑和3mm的內(nèi)徑能夠更好地兼顧HPLC和UPLC的方法轉(zhuǎn)移的需要，在流速和進樣量上更接近最常規(guī)的4.6mm內(nèi)徑的色譜柱。

  

  在相同流動相條件下，不同色譜柱對NCEs混合物分析得到的色譜圖的對比

  （a）色譜柱：Waters Cortecs C18+, 2.7 μm, 50 x 3.0 mm;

  （b）色譜柱：Waters BEH C18 column ,1.7 μm, 50 x 3.0 mm，顯示出更嚴重的峰拖尾

• 選用50mm的柱長可以獲得在速度和峰容量之間平衡的靈活性。在梯度時間（Time of Gradient）從一分鐘增加到十分鐘，峰容量（Peak Capacity）很容易就從100增加到了300，如下圖 ：

梯度時間分別為（a）1min；（b）3min；（c）10min時的峰容量

• 選擇 0.05%甲酸作為水相，主要是考慮到流動相更容易制備，同時在于質(zhì)譜聯(lián)用的時候可以具有更高的離子化效率。

• 選擇乙腈作為有機相，是因為它的黏度低，產(chǎn)生的壓力相對甲醇低。

※需要注意的是，在低波長檢測（小于230nm）時，最好往乙腈里加入0.03% 甲酸來平衡AB兩相流動相之間的吸收差，保證更好的基線平穩(wěn)。

• 兩段的梯度（乙腈：5%到60％，60％到95%）相比起一個大梯度（5%到95% 乙腈）更加適合藥物小分子中疏水性較低化合物的分離。

• 選擇1ml／min的流速是根據(jù)選擇的色譜柱。

• 一般來說35-40度的柱溫屬于常規(guī)設(shè)置。

• 如果使用紫外檢測器，波長可以根據(jù)目標化合物的最大吸收波長調(diào)整。

• 如果使用質(zhì)譜檢測器，在ESI正模式下從150 到1000 amu掃描對于絕大多數(shù)藥物小分子化合物都是使用的。

這種2分鐘通用HPLC / UV / MS方法的優(yōu)點是分析速度快，峰容量合理，并能獲取很多NCEs的優(yōu)異峰形。希望今天的文章能夠幫助你更容易地應(yīng)對新液相方法的開發(fā)。

原文還對更多的色譜柱，流動相的選擇做了對比測試，同時提供了多個實際的例子，如果有興趣可以聯(lián)系小編木木森森:

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