第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報990240第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報舊萬冂數(shù)據(jù)資源系統(tǒng)JOURNAL OF THE FOURTH數(shù)穿化期刊WANFANG DATA CHINAINFO)MILITARY MEDICAL UNIVERSITY DIGITIZED PERIODICAL1999年第20卷第2期Vol.20No.21999聚乙二醇對人源ABO定型血清效價的影響楊世明楊棖林關(guān)鍵詞∶聚乙稀二醇類;定型血清ABO血型系統(tǒng);效價中圖號:R457.11文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B0引言實(shí)驗(yàn)觀察與應(yīng)用表明聚乙二醇(PG)能增強(qiáng)酶法配血和間接抗人球蛋白試驗(yàn)的敏感性,縮短了配血試驗(yàn)和不完全抗體的檢測時間[1].為了解PEG能否提高人源ABO定型血清的效價我們用PEG濃縮人源ABO定型血清,對PEG不同分子量、不同濃度、不同濃縮時間和溫度對血清效價的影響,以及濃縮后不同層次的血清效價進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)比較和應(yīng)用.材料和方法1試劑與器材PEG試劑,日本進(jìn)口天津天秦精細(xì)化學(xué)品有限公司分裝,批號930109pH7.O磷酸鹽緩沖液(PBS),兕八生理鹽水,單抗血清.扭力天平,離心沉淀器,低溫離心機(jī),水浴箱,玻璃試管和瓶子等.1.2實(shí)驗(yàn)與應(yīng)用方法收集獻(xiàn)血員化驗(yàn)檢查肝功合格的標(biāo)本血清,置4°C冰箱48h吸收冷凝集素,離心分離血清置56°C水浴箱30min滅活,用50mL幾新鮮紅細(xì)胞懸液測定原血清基礎(chǔ)效價上述血清加入等量PEG溶液混勻放15mn~60mn,3000mn離心10mn~30mn,棄去上凊液沉淀物按100饑加入生理鹽水稀釋,再測定濃縮后的血清效價、親和力和特異性,合格后置-20°C冰箱保存;將因故不輸?shù)难菏占?低溫離心30min,分離血清置56°C水浴仉,以30o0r/min離心30min分離上層血清測定其效價、親和力和特異性后按上述方法濃縮..3結(jié)果判定測定PG濃縮前、后血清效價、親和力和特異性,所有試驗(yàn)重復(fù)3次,測定10份標(biāo)本濃縮后血清效價均增高2個滴度和積分均增加13以上判為效價提高.2結(jié)果21不同PG分子量對血清效價的影響將3種不同分子量的PEG粉劑均按200mLL濃度配制,加入等量血清攪拌濃縮分離血清測定效價結(jié)果顯示PEG-6千提高血清效價的效果非常明顯,PEG-1萬和PEG-2萬效果較差(表1)22PEG濃度對血清效價的影響用PBS將PEG-6千粉中國煤化工劑分別配成2004,150L和100的濃度用不同濃度的PEG溶閥限細(xì)機(jī)A業(yè)消品果表明150m的PEG濃度提高血清效價的效果最好(表2fle∥/ E Vak/dsiydxxb4/dsy9diy9902/990240hm(第1/3頁)201032217:5101第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報990240表1不同PEG分子量濃縮前/后效價的比較PEG分子量效價積分親和力/s2萬32/323737>30/>301萬32323737>30/>300.6萬32/12837/85>30/<15表2不同PEG濃度濃縮前/后效價的比較PEG濃度/mLL1效價積分親和力/s20032/6437/59>30>2015032/51237/95>30<1010032323747>30/2523不同層次血清效價的比較將150 g/L PEG溶液與血清等量混勻30min后,300mnin離心30min測定不同層次的血清效價結(jié)果沉淀物效價為512積分95親和力<10明顯高于1/2和下1/3層的血清效價(表3)表3PEG濃縮后不同層次血清效價的比較血清層次效價積分親和力1/213下1/38>25沉淀物512<1024濃縮時間對血清效價的影響將PEG溶液與血清混勻,分別濃縮15min,30min和60min結(jié)果15min,30min效價均為256積分8360min效價為512積分95.25不同濃縮溫度對血清效價的影響將PEG溶液與血清混勻后分別置4°℃,22°C和37C濃縮結(jié)果4C效價512積分922C效價256積分83,37C效價128積分7126血清抗體特異性測定將濃縮后的定型血清分別與A型、B型、O型和AB型各10名獻(xiàn)血員紅細(xì)胞作凝集試驗(yàn)證實(shí)特異性合格.3討論高質(zhì)量的ABO定型血清是正確鑒定血型確保輸血安全的前提近年來發(fā)達(dá)國家已有用單抗血清取代人源ABO定型血清的趨勢但國內(nèi)該工作起步較晚且單抗血清還存在著因其特異性強(qiáng)而只能判別一個抗原決定族,可能會使一些A、B亞型漏檢;因其濃度高就有大得多的機(jī)會與另一些非特異性分子發(fā)生假陽性反應(yīng)[2],以及單抗血清本身也易被細(xì)菌污染而造成血型誤定等缺點(diǎn)[3],目前還不能完全取代人源A中國煤化工寸人源ABO尤其是稀有定型血清進(jìn)行最適制備、保存和提高其效價的HCNMHG要意義.我們研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)PG-6千及其150g/的濃度提高血清效價的效果最明顯PEG提高人源ABO定型血清效價可能與血清抗體是免疫球蛋白,PEG是線形大分子物fle∥/ E Vak/dsiydxxb4/dsy9dy9902/990240hm(第2/3頁)201032217:5101第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報990240質(zhì),具有極強(qiáng)的親水性加入反應(yīng)體系后經(jīng)離心力的作用致使血清蛋白濃縮和沉淀[4],從而顯著提高血清效價我們先后收集A,B型血清各8α0m(效價32),用此方法濃縮后,血清效價均提高到256~512積分83~95親和力8s~12出現(xiàn)凝集,3min時凝塊大于1.5mm2經(jīng)與傳統(tǒng)方法制備的ABO定型血清和單抗血清進(jìn)行8000余人次的試驗(yàn)比較,同時用PEG溶液作陰性對照結(jié)果符合率為100%用PEG濃縮法提高人源ABO定型血清效價方法簡便效果明顯不需特殊儀器設(shè)備,PEG容易購買,毒性低長期貯存不變質(zhì).此法具有廢物利用,節(jié)約血液資源降低成本費(fèi)用,提高經(jīng)濟(jì)效益等優(yōu)點(diǎn).作者簡介:楊世明,男,43歲,主管技師作者單位∶楊世明楊棖林第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院輸血科陜西西安710038參考文獻(xiàn)楊世明楊棖林,洪炳灸聚乙二醇快速檢測不完全抗體及其應(yīng)用.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,1995;16(1):74752李振才.紅細(xì)胞血型及血型診斷試劑研究進(jìn)展.見:全軍輸血專業(yè)管理委員會編輸血與輸血相關(guān)領(lǐng)域研究進(jìn)展北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社196:17-203方志明沈光趙桂珍.超濃縮法制備人源抗A血清定型試劑的質(zhì)量觀察.中國輸血雜志,1995:8(3):131-1324桂勇陳宏礎(chǔ),黃天祿用PEG分離血清高密度脂蛋白膽固醇及其亞組份的方法學(xué)探討.臨床檢驗(yàn)雜志,19875(4):170-172編輯王小仲收稿日期:199802-17;修回日期:1998-06-15中國煤化工CNMHGfle∥/ E Vak/dsiydxxb4/dsy9dy902/990240hm(第3/3頁)201032217:5101