首頁 > 行業(yè)資訊 > 被忽略的強極性堿性化合物液相分析方法開發(fā)技巧!

被忽略的強極性堿性化合物液相分析方法開發(fā)技巧!

時間：2023-06-20 來源：瀏覽：

被忽略的強極性堿性化合物液相分析方法開發(fā)技巧!

行者化學科訊

化學科訊

微信號 ChemNews

功能介紹專注化學研究，實時為化學科研者提供行業(yè)資訊、文獻解讀、化學工具、化學分子檢索的實用性融合平臺。

收錄于合集

點擊關注，化學科訊！

摘要

作為藥物分析人員，堿性化合物是我們無法避免會遇到的一類化合物。對于弱極性堿性化合物（解離狀態(tài)下，該類化合物對應的logD通常會大于0），其在酸性、中性及堿性流動相體系中，均可在常規(guī)C18色譜柱上獲得良好的保留；對于中等極性化合物（在解離狀態(tài)下，該類化合物對應的logD通常會在-1與0之間），其在小于自身pka的流動性體系中，在常規(guī)C18色譜柱上通常呈現(xiàn)極弱保留或無保留特性，在極性官能團嵌合的C18色譜柱（常見的有RP系列色譜柱、AQ系列色譜柱及T3色譜柱）上通常會得到有效保留；對于強極性堿性化合物（在解離狀態(tài)下，該類化合物對應的logD通常會小于-1），其在小與自身pka的流動性體系中，在常規(guī)C18色譜柱及極性官能團嵌合的C18色譜柱上通常很難實現(xiàn)保留。

對于強極性堿性化合物無保留現(xiàn)象，常規(guī)增加保留的做法有：

1）配制高于化合物pka約1.5個單位的流動相，以維持化合物分子態(tài)，繼而讓化合物在耐堿C18色譜柱上產(chǎn)生保留；

2）選擇強陽離子交換柱（鍵合磺酸基團），通過調(diào)節(jié)流動相的pH以維持磺酸基團及堿性化合物的離子態(tài)，通過庫倫作用力增加化合物保留。其保留機理如下：

3）選擇HILIC色譜柱通過強氫鍵作用力增加強堿性化合物的保留。

4）選擇常規(guī)C18色譜柱搭配長鏈磺酸鹽離子對試劑使用，以增加強堿性化合物的保留。其作用機理如下：

5）選擇具有強陽離子交換作用、疏水作用及氫鍵作用的混合作用力色譜柱（如comix系列），以增加強堿性化合物的保留。

除此之外是否還有其他的選擇呢？我們首先來看幾個案例。

案例1：阿替洛爾（Atenolol）

該化合物的關鍵理化信息如下：

圖1：阿替洛爾關鍵理化信息

由上，當流動相的pH≤5.5時，阿替洛爾的logD的預測值≤-2.82，常規(guī)流動相體系中很難實現(xiàn)有效保留。為實現(xiàn)該化合物的有效保留，EP收錄的測定法采用了在流動相中加入長鏈烷烴磺酸鹽的辦法，具體色譜條件如下：

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（RP18-5 end-Capped or Waters Symmetry C18, 150mm*3.9mm*5μm）；以磷酸緩沖液（取磷酸二氫鉀3.4g，辛烷磺酸鈉1.0g，四丁基硫酸氫銨0.4g，加水1000ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）-四氫呋喃-甲醇（900 : 20 : 180）為流動相，等度洗脫。流速為每分鐘0.6ml；檢測波長為226nm；進樣體積為10μl。

對應的典型加樣供試品譜圖如圖2所示：

圖2：長鏈烷烴磺酸鹽體系下阿替洛爾加樣供試品譜圖

Hisham Hashem ^【1】等為實現(xiàn)該化合物的有效保留采用了在流動相中加入高氯酸鈉的辦法，具體色譜條件如下：

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Intersil? ODS-3, 150mm*4.6mm*5μm）；以50mM高氯酸鈉溶液為流動相A，乙腈為流動相B，按下表進行線性梯度洗脫。流速為每分鐘1.0ml；柱溫箱溫度為30oC；檢測波長為230nm；進樣體積為20μl。

線性洗脫梯度程序

時間（分鐘）	流動相A（%）	流動相B（%）
0	95	5
8	50	50
23	50	50

典型對照譜圖如圖3所示：

圖3：高氯酸鹽體系下阿替洛爾對照譜圖

高氯酸鹽體系下，阿替洛爾保留時間約為6min，對應的保留因子k≈2，此時的洗脫陡度為5.6%B/min，對應的有機相強度為34%，故此，緩梯度洗脫時，可以顯著增加阿替洛爾的保留。由此，高氯酸可以代替長鏈烷烴磺酸鹽用于流動相，來增加強極性堿性化合物的保留。

案例2：拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）

EP收錄的測定法色譜條件如下：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Hypersil BDS C18, 150mm*4.6mm*5μm）；以磷酸緩沖液（取磷酸二氫鉀2.7g，加水1000ml使溶解，取磷酸緩沖液900ml、三乙胺6ml，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0）為流動相A，乙腈為流動相B，按下表進行線性梯度洗脫。流速為每分鐘1.0ml；檢測波長為270nm；進樣體積為10μl。

線性洗脫梯度程序

時間（分鐘）	流動相A（%）	流動相B（%）
0	85	15
4	85	15
14	20	80

拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）分離圖如圖4所示：

圖4：EP收錄拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）分離圖

Jelena ?olovi? ^【2】等人在如下色譜條件下研究了拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）分離情況：

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Zorbax Extend C18, 150mm*4.6mm*5μm）；以140Mm高氯酸水溶液（用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至2.5）-乙腈（77 : 33）為流動相，等度洗脫。流速為每分鐘1.0ml；檢測波長為270nm；進樣體積為5μl。拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）分離圖如圖5所示：

圖5：文獻[2]拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）分離圖

通過查詢沃特世的Selectivity Chart，可知Hypersil BDS C18的疏水指數(shù)為2.455、選擇性指數(shù)為0.291；Zorbax Extend C18的疏水指數(shù)為2.957、選擇性指數(shù)為0.331，故此可默認兩款色譜柱等效。高氯酸體系下拉莫三嗪（Lamotrigine）及其位置異構（Imp G）的分離優(yōu)勢可歸因與高氯酸根。

根據(jù)上述兩個典型的案例及相關文獻 ^【3】可以明確高氯酸鈉作為離液劑的一種，可以實現(xiàn)強極性堿性化合物在酸性條件下的有效保留；可以提供結構類似的強堿性化合物優(yōu)越的選擇性；且可以規(guī)避長鏈烷烴類磺酸鹽對色譜柱不可逆的改性。類似的作用的陰離子還有PF6-、ClO4-、BF4 -、CF3COO –等 ^【3】。至于其作用機理不在此處展開敘述，感興趣的同仁可自行研讀相關文獻。

參考文獻

[1] Hisham Hashem, Ibrahim Adel Ehab. A novel stability indicating HPLC-method for simultaneous determination of atenolol and nifedipine in presence of atenolol pharmacopeoial impurities. J. Pharm. Sci., 2015, 5 (08): 017-025.

[2] Jelena Colovic, Milena Rmandic. Robust Optimization of Chaotropic Chromatography Assay for Lamotrigine and its Two Impurities in Tablets. Chromatographia, 2018.

[3] J. Flieger. The effect of chaotropic mobile phase additives on the separation of selected alkaloids in reversed-phase high-performance liquid chromatography Journal of Chromatography A, 1113 (2006) 37–44

END

資料領取

回復你需要資料的關鍵詞，查看領取

后臺回復 “ChemDraw ” 領取破解版安裝包

回復 “MestReNova” 領取破解版安裝包

回復 “EndNote X9.1 ” 領取破解版安裝包

回復 “有機化學” 領取經(jīng)典化學書籍

回復 “科研禮包” 領取更多豐富所需資料

回復 “資料全集” 領取5款破解版資料

有償征稿

本平臺長期征稿，投稿請發(fā)至郵箱：，目前僅接受原創(chuàng)首發(fā)類相關稿件或頂級化學外刊文獻的前沿解讀。來稿郵件標題：【微信投稿】+文章標題+作者、稿件請以附件方式發(fā)送，我們將從中挑選并發(fā)表在“化學科訊”微信公號。一經(jīng)發(fā)表，稿酬豐厚，歡迎賜稿，期待佳作。

NO. 1

往期推薦

Historical articles

武大130年來首次！Nature兩連發(fā)！

太慘了！被踢出SCI，陸續(xù)撤回中國學者91篇文章，涉及眾多名校，原因竟然是....

徹底清理！學術不端論文存量，從2018年開始查！

中國首位！985研究員，獲國際大獎！

連續(xù)2篇！南京大學，發(fā)Nature、Science！