本標準規(guī)定水體中孔雀石綠殘留量的高效液相色譜檢測方法。
本標準適用于水體中孔雀石綠殘留量的檢測。？[第1頁] ICS 6 7.050 B 5024200-2009 DB44 廣 東 省 地 方 標 準 DB44/T 570-2008 水體中孔雀石綠殘留量的測定 　　— —液相色譜熒光法 Determination of malachite green residues in fishery water by high performance 　　　　　　liquid chromatography with fluorescence detector 2008-12-31發(fā) 布 2009-04-01實 施 廣東省質量技術」監(jiān)督局發(fā)布 [第2頁] DB44/T 570-？ 2008 月 IJ舀 本標準的附錄A為資料性附錄 。 本標準由廣東省海洋與漁業(yè)局提出 。 本標準由中國水產科學研究院南海水產研究所質量與標準化技術研究中心歸口 。 本標準起草單位：中國水產科學研究院南海水產研究所 。 本標準主要起草人：岑劍偉 、 楊賢慶 、 李來好 、 郝淑賢 、 石紅 、 馬海霞 、 戚勃 、 孫滿義 。 [第3頁] DB44/T 570-？ 2008 水體中孔雀石綠殘留量的測定液相色譜熒光法 1范圍 　　本標準規(guī)定水體中孔雀石綠殘留量的高效液相色譜檢測方法 。 　　本標準適用于水體中孔雀石綠殘留量的檢測 。 2規(guī)范性引用文件 　　下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其隨后所有的 修改單 （ 不包括勘誤的內容 ） 或修訂版均不適用于本標準 ， 然而 ， 鼓勵根據本標準達成協議的各方研究 是否可使用這些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本適用于本標準 。 　　GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3原理 　　樣品中殘留的孔雀石綠經過二氯甲烷提取后用硼氫化鉀還原為其相應的代謝產物 ， 固相萃取柱凈化 后 ， 反相色譜柱分離 ， 熒光檢測器檢測 ， 外標法定量 。 4試劑 　　除另有規(guī)定外 ， 所有試劑均為分析純 ， 試驗用水應符合GB/T 6682一級水的標準 。 4. 1乙腈：色譜純。 4.2二氯甲烷。 4. 3冰乙酸。 4.4氨水。 4.5孔雀石綠：純度X98%. 4.6提取液：鹽酸羥胺3g ， 對甲苯磺酸0.24g溶于100 mL水中。 4. 7硼氫化鉀溶液［0.2 %]：稱取0. 2g硼氫化鉀溶于100 ML水中 ， 現配現用 。 4.8乙酸銨緩沖溶液［0. 125 mol/L]：稱取9.64 g無水乙酸銨溶解于1 000 ML水中 ， 用冰乙酸調pH 至4.5， 過0.45 μ 皿濾膜備用 。 4.9乙酸銨緩沖溶液［0. 1 mol/L]：稱僅7. 71 g無水乙酸銨溶解于1 000 ML水3， 用氨水調pH到10.0, 過0.45 μ m 濾膜備用 。 4.10 PRS柱洗脫液：乙酸銨緩沖溶液 （ 4.9)＋乙U=1+1， 現配現用 。 4.11陽離子交換柱：Varian PRS柱或者相當者 ， 500 mg, 3 mL ， 使用前用5 mL乙腈活化 。 4.12標準儲備溶液［100 μ g/mL]：準確稱取孔雀石綠標準品 ， 用乙腈配制成100 leg/ML的標準貯備液 ， -18℃避光保存． 4.13標準中間液［1 Pg/mL]：吸取孔雀石綠的標準儲備溶液 （ 4. 12)1.00 mL至100 mL容量瓶 ， 用乙 腈稀釋至刻度 ， 一18℃避光保存 。 4.14標準工作溶液：吸取一定量的孔雀石綠標準中間液 （ 4. 13)， 加入硼氫化鉀溶液 （ 4.7) 0.40 mL ， 用 乙Ph稀釋至2.00 mL ， 配制成適當濃度梯度的標準工作溶液 ， 現配現用 。 5儀器 5. 1高效液相色譜儀：配熒光檢測器 。 [第4頁] DB44/T 570一一2008 5.2振搖器或搖床。 5.3旋轉蒸發(fā)儀。 5.4固相萃取裝置。 6色譜條件 6. 1色譜柱：C18柱， 250 mm X 4.6 mm （ 內徑） 粒度5 Pm ：或與之相當的色譜柱。 6.2流動相：乙腈十乙酸銨緩沖溶液（ 0. 125 mol/L, pH4.5) =80+20. 6.3色譜柱溫：38 C. 6.4流速：1.5 mL/min. 6.5激發(fā)波長：265 rim. 6.6發(fā)射波長：360 nm. 6. 7進樣最：50 YL. 7測定步驟 7. 1提取 　 　先將 水樣用0.45 Pm 膜 過濾 ， 除去 固體雜 質 。 準 確移取20 mL水樣 于100 mL分 液漏斗 ， 加入2 mL提取 液 （ 4. 6) , 20 mL二氯甲烷 ， 震搖5 min ， 靜置 ， 將二氯甲烷層移至100 mL的梨形瓶 。 向分液漏斗加入2 mL提取液 （ 4.6） 和20 mL二氯甲烷重復上述步驟一次 ， 靜置分層后 ， 將二氯甲烷層并入同一梨形瓶 ， 于 30℃條件下減壓hK發(fā)至近干 。 7. 2凈化 　 　 將PRS柱 子 接 到 固 相 萃 取 裝 置 上 ， 先 用5 mL的 乙 腈 分 兩 次 活 化 柱 ， 然 后 用2 mL乙MY]洗 滌 梨 形 瓶 ， 洗 液 加 入1 mL硼 氫 化 鉀 （ 4.7)， 輕 輕 振 搖 ， 過 柱 ， 再 加 入2 mL的 乙P"洗 滌 梨 形 瓶 ， 過 柱 ， 將PRS柱 抽 至 近 干 ， 用3 mL PRS柱洗脫液 （ 4.10） 洗脫 ， 接收于5 mL刻度管中定容至3 mL ， 過0.45 pm 濾膜 ， 供液相色譜備 用 。 7. 3色譜分析 　　分別注入50 μ L孔雀石綠的標準工作液及樣品提取液于液相色譜儀中 ， 按上述色譜條件進行色譜分 析 ， 記錄峰面積 ， 響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內 ， 根據標準品的保留時間定性 ， 外標法定量 。 標準色譜圖參見附錄A中圖A. 1. 7.4空白試驗 　　除不加試樣外 ， 均按上述測定步驟進行 。 8計算 　　樣品中孔雀石綠的殘留量按式 （ l） 計算 。 　 　 　 　 　 X ＝＝ AxC, xTX - x 1000 ................................................... (1) 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 月 s＞＜ ％ 式 中 ： X -—樣 品 中 待 測 組 分 殘 留 量 ， 單 位 為 微 克 每 升 （ Pg/L) Cs -—待 測 組 分 標 準 工 作 液 的 濃 度 ， 單 位 為 微 克 每 毫 升 （ μ g/ML) : 彳 — — 樣 品 中 待 測 組 分 的 峰 面 積 ； As-—待 測 組 分 標 準 工 作 液 的 峰 面 積 ； F一 一 樣 液 最 終 定 容 體 積 ， 單 位 為 毫 升 （ mL) : vo-—樣 品 體 積 ， 單 位 為 毫 升 （ mL) . 注 ： 計 算 結 果 需 扣 除 空 白 值 。 [第5頁] DB44/T 570-2008 9線性范圍 　　孔雀石綠標準溶液的線性范圍：0.0005 μ g/mL^-0.8 μ g/mL. 10方法檢測限 　　本方法的檢測限為0.2 ug/L. 11相對標準偏差 　　本標準的相對標準偏差＜15%. 12方法回收率 　　本方法的回收率>, 70 %a [第6頁] DB44/T 570一一2008 　　　　附錄A 　 　 　 （ 資 料 性 附 錄 ） 孔雀石綠標準的液相圖譜 w — — 一 — — 一 一 一 一 — — 一 一 — — — — ， 一 — — 一 — — 0 2 4 0 8 1c 圖A. 1孔雀石綠標準的液相圖譜