實(shí)用中醫(yī)藥雜志2013年6月第29卷6期(總第245期)JOURNAL OF PRACTICAL TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 2013. Vol 29 No6黃芩乙醇回流提取工藝研究楊宏靜(重慶三峽醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校,重慶404020)[中圖分類(lèi)號(hào)]R282.710.2[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1004-2814(2013)06-492-02摘要]目的:研究?jī)?yōu)選黃芩乙醇回流的提取工藝。方法:采用單因素考察及正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),以黃芩苷的含量為考察指標(biāo)優(yōu)選黃芩提取工藝。結(jié)果:黃芩提取工藝選擇為加8倍量θ%乙醇提取2次,第1次2h,第二次1.5。結(jié)論:用此方法提取黃芩藥材效率高、結(jié)果穩(wěn)定。[關(guān)鍵詞]黃芩;黃芩苷;單因素考察;正交設(shè)計(jì);提取工藝Abstract]Objective: to study the best extraction process for Scutellariae Radix. Methods: Using single factor and orthogonal design todetermine the content of baicalin as the index of evaluation Results: The optimum condition for the extraction of Scutellariae Radix was adding 8 times of60% alcohol, extracting for 2 hours first time and 1.5 hours second time, totally extracting 2 times. Conclusion: The optimum condition was efficient andI Key words Scutellariae Radix; Baicalin; Single factor; Orthogonal design; Extraction technology黃芩為唇形科植物黃芩 Scutellaria baicalensis Georgi合并,定容至200mL量瓶中,備用的干燥根。黃芩味苦、性寒。歸肺、膽、脾、大腸、黃芩苷含量測(cè)定方法:①對(duì)照品溶液的配制:取小腸經(jīng),具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效黃芩苷對(duì)照品約10mg,精密稱(chēng)定,置250mL量瓶中。黃芩中主要含有黃酮類(lèi)化合物,以黃芩苷為代表的加甲醇溶解并稀釋至刻度,即得。②供試品溶液的制黃酮類(lèi)成分是黃芩抗菌、抗炎、解熱的主要有效成分3。備:各精密量取提取液2mL,置50mL量瓶中,加甲醇為了充分提取黃芩的有效成分,我們用單因素考察及正稀釋至刻度,搖勻,精密量取1mL,置10mL量瓶中交試驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)黃芩的提取工藝進(jìn)行了硏究,確定了適加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),即得。③色譜條件合黃芩生產(chǎn)提取的工藝。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.2%磷1實(shí)驗(yàn)儀器與材料酸溶液(45:55)為流動(dòng)相,流速lmL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)儀器?；亓魈崛⊙b置、高效液相色譜儀( Agilent 1100)、28σnm。④測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品色譜柱: Waters Sunfire CI84.6×150mm。溶液各10μL,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。試劑與藥品。黃芩藥材(購(gòu)于安國(guó)以嶺中藥飲片有實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表限公司)、黃芩苷(批號(hào)110715-200815,購(gòu)于中國(guó)藥表1黃芩提取溶媒考察結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)因素水平黃芩苷含量(mg品生物制品檢定所)、乙醇為醫(yī)用級(jí)、甲醇為色譜純乙醇水為重蒸水。60%乙醇87.6270%乙醇2方法與結(jié)果2.1提取溶媒考察結(jié)論:由以上結(jié)果可知,60%乙醇作溶媒時(shí),黃芩素水平:參考有關(guān)文獻(xiàn)中黃芩的提取工藝研究苷含量高于水和其它濃度乙醇作溶媒時(shí)黃芩苷的含量選取水、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇為故選擇60%乙醇為提取溶媒。單因素考察水平,進(jìn)行試驗(yàn)22正交試驗(yàn)中國(guó)煤化工正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方法:取黃芩選凈,稱(chēng)取15g,分別加入6倍CNMHG次數(shù)(A)、量的溶劑,回流提取2次,每次1.5小時(shí),提取液濾過(guò),提取時(shí)間(B)、加醇量(C)為考察因素,以黃芩苷的實(shí)用中醫(yī)藥雜志2013年6月第29卷6期(總第245期)JOURNAL OF PRACTICAL TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 2013. Vol 29 No6含量為指標(biāo),選取如下水平進(jìn)行試驗(yàn),見(jiàn)表2。定的工藝為A2B(3,2C2,即加8倍量60%乙醇提取2次表2因素水平表第1次2h,第2次1.5h。水平提取次數(shù)提取時(shí)間加醇量(次)(h)(相當(dāng)于藥材倍數(shù))23驗(yàn)證試驗(yàn)取藥材,浄選干燥,粗碎,按處方配比,稱(chēng)取黃芩15g,以60%乙醇為提取溶媒,按最佳工藝A3B3C3組實(shí)驗(yàn)方法:取藥材,凈選干燥,粗碎,按處方配比合條件和選定工藝A2B(3,2)C2的組合條件進(jìn)行重復(fù)稱(chēng)取葛根15g,以60%乙醇為提取溶媒。在平行操作的驗(yàn)證對(duì)比實(shí)驗(yàn),測(cè)定黃芩苷的含量,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5條件下,按L9(3)4正交表,回流提取,提取液合并長(zhǎng)5驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果濾過(guò),減壓回收乙醇,適量濃縮,轉(zhuǎn)移至1000mL量瓶中,試驗(yàn)號(hào)試驗(yàn)條件黃芩苷含量(mg/均含量(mA, B,C3110.07108.16放冷至室溫,加60%乙醇稀釋至刻度,搖勻,備用。107,72A, B,Cs106.68黃芩苷的含量測(cè)定方法:同上。23456A, B104.08102.96實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3和表4。2B(3.2)C2102,15表3黃芩正交實(shí)驗(yàn)表由上表可見(jiàn),以黃芩苷的含量為考察指標(biāo),最佳工實(shí)驗(yàn)號(hào)4(次)B(h)C(倍)D(空白)Yi(mg/g)藝ABC3和選定工藝AB(32C2的差距均不大;但選定工藝省工節(jié)能,故選定AB(3,2C2為提取工藝,即藥材234567891.69加8倍量60%乙醇提取提取2次,第1次2h,第2次1.5h23討論106.541.5黃芩中所含黃酮類(lèi)成分為其主要有效成分,此類(lèi)成266.16263.86分易溶于乙醇。通過(guò)單因素提取溶媒的考察,得出此類(lèi)296.79281.75276.3028240311.2228694294.6928成分在60%乙醇中溶解度較大。用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),優(yōu)選l2514563970884.1569622.1071123.56G=834.358808430793830676341.6979749.76CT=7744.61了影響提取物收率的3個(gè)因素,得出最佳提取工藝,結(jié)968578982334.5686842.2081658.78Rj=+lij+236398.58232558.7723280599232532.09合實(shí)際生產(chǎn),對(duì)各影響因素進(jìn)行了優(yōu)化,最終確定了黃芩的提取工藝為加8倍量60%乙醇提取2次,第1次提方差分析方差來(lái)源離均差平方和自由度均方取2h,第2次提取1.5h135791[參考文獻(xiàn)]C[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部))=1900,F001(2,2)(2010版)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社結(jié)果:由表3可知,3個(gè)因素的影響大小順序?yàn)樘?010:283取次數(shù)大于加醇量大于提取時(shí)間。最佳工藝為A3BC3[2]高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社即加10倍量60%乙醇提取3次,每次2h。表4中方1998:118差分析表明,A因素對(duì)黃芩苷的含量有顯著性影響(P[3]李欣,魏朔南.黃芩的生物學(xué)研究進(jìn)展「J].中國(guó)<0.05),B因素和C因素對(duì)黃芩苷的含量均無(wú)顯著性野生植物資源影響。A因素中,隨著提取次數(shù)的增加,黃芩苷的含量[4]丁芳林,張?chǎng)┙?陳波,等.正交法優(yōu)化超聲醇提雖有不同程度的增加,但Ⅱ到Ⅲ增幅變小,為了縮短生產(chǎn)周期,采用提取2次。B因素對(duì)黃芩苷的含量無(wú)顯著黃芩活性成分研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)008,28(3):14-1性影響,考慮到浸提時(shí)溶媒對(duì)藥材組織的浸潤(rùn)和滲透過(guò)[5]宋承富程,故將提取時(shí)間選為第1次2h,第2次1.5h。C因素空[J].中華中中國(guó)煤化工醫(yī)藥學(xué)刊對(duì)黃芩苷的含量亦無(wú)顯著性影響,考慮到藥材提取的吸CNMHGL收福日期]2013-02-16收溶劑膨脹,因此將用量選定為8倍量。故經(jīng)優(yōu)選后確