158臨床消化病雜2001年第13卷第4期乙醇對胃乙醇脫氫酶活性變化的影響 R5T A中國醫(yī)科大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院消化內(nèi)科(沈陽1001王國祥程云友李軍劉春榮摘目的:探討乙醇對胃乙醇脫氫酶( Alcohol dehydrogenase,dh)活性變化的影響。方法: Wistar大鼠52只隨機(jī)分成兩組:模型組32只,對照組20只。用乙醇直接灌胃的方法建立大鼠模型用組織細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)觀察ADH活性變化,并用 LUZEX--F灰度圖像分析儀進(jìn)行半定量。結(jié)果:隨著乙醇灌注量的增加和灌注時間的延長,胃adH活性進(jìn)行性下降與對照組有顯著性差異(P<0.05;停止注后1個月、胃ADH活性明顯恢復(fù),且與正常對照組無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論:乙醇導(dǎo)致胃ADH活性進(jìn)行性下降從而降低了乙醇首過代謝增加了乙醇對肝臟等器官的毒害作用。關(guān)鍵詞乙脫氫酶乙醇組織細(xì)胞化學(xué)胃 Effect of Alcohol on Active Alteration of Gastric Alcohol Dehydrogenase Wang Guo-xiang, Cheng Yun-you, LI Jun, et al Digestion Department of Internal Medicine. The First Affiiated Clnical Hospital, China Medical Uaiversity, Shenyang110001 Abstract Purpose: Effect of alcohol on activity variety of gastric alcohol dehydrogenase( ADH) was investigated. Methods: Fifty-two rats were divided into two groups in model one(32/52) and control one (20/52), at random. Model one was made of directly perfusing alcohol into stomach. The activity varieties of gastric ADH were observed by the optical microscopy after gastric tissues were stained by enzyme hista- cytochemistry assay. The activity varieties were determined by LUZEX-F analysis instrument as a semi quantitative method. Results: It was shown that the activities of gastric ADH gradually decreased along with the volume of alcohol increased and the duration of perfusion prolonged. There were significant differ- ences between model group and control one(<0.05). The activity of gastric ADH significantly recovered one month after abstinence from alcohol. There were not significant differences between two groups(P 0.05). Conclusion: Alcohol resulted in activity descending of gastric ADH, as a result of decreasing first Key words Alcohol dehydrogenase Alcohol Enzyme histo-cytochemistr assay Stomach乙醇脫氫酶( Alcohol dehydrogenase,ADH)是參下,用平衡飼料喂養(yǎng)。與乙醇代謝的重要酶類之一。它主要氧化乙醇成1.2實(shí)驗(yàn)方法乙醛,乙醛又在乙醛脫氫酶作用下生成乙酸,最后分解1.2.1動物模型建立:實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為兩組,其中成二氧化碳和水。近年來,胃ADH在乙醇首過代謝對照組20只,模型組32只。正常喂養(yǎng)1周后開始建(First pass metabolism,FPM)中的作用倍受人們矚立模型。(1)模型組給予40%的乙醇(國產(chǎn)分析醇),8目,認(rèn)為胃ADH在乙醇FPM中起主要作用231然g/(kgd),分3次胃至第4周末,將乙醇濃度升至而目前關(guān)于長期飲酒后的胃ADH活性變化的研究較50%,9g/(kgd),分3次至第8周末,乙醇量升少,另外,胃ADH活性的變化與胃粘膜病理改變的關(guān)至10g/(kgd)分3次灌胃;至第12周末模型建立成系亦未確定,為此我們進(jìn)行了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)性研究。功(2)對照組給予相同體積的蒸餾水灌胃,日3次兩組均于開始胃后4周末、8周末、12周末分批處1對象和方法死:模型組各8只,對照組各5只。兩組余下的動物用平衡飼料喂養(yǎng)1個月后處死。麻醉后迅速切取新鮮胃1.1實(shí)驗(yàn)對象6周齡雄性 Wistar大鼠52只,體重體組織,分別進(jìn)行相應(yīng)固定留待病理酶組織化學(xué)檢200±10g,由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供,每籠8查。只,分籠飼養(yǎng)按夜時程,在室溫及穩(wěn)定濕度條件1.2.2胃組織病理學(xué)檢查:胃組織行常規(guī)HE染色,臨床消化病雜2001年第13第4期159光鏡下觀察胃組織(主要是粘膜層)的病理改變。表2停止灌注乙醇后1個月模型組與對照組胃ADH灰度值1.2.3ADH酶組織化學(xué)檢測方法1:(1)迅速把組織x±s)切成適當(dāng)大小(約5×5×3mm),放入OCT包埋劑,用組別ADh(千冰丙酮或液氮迅速凍結(jié)。(2)用 Cryostat(-15~16周對照組5129.09±11.7020℃)制成12m之冰凍切片。(3)用0.1MPBS(pH模組8130.01±9.107.4)稀釋2%~4%的戊二醛固定1分鐘。(4)用0.1·與對照組相比P>0.05MPBS洗45分鐘或過夜。(5)切片在下述孵育液中孵育,用NBT法為37℃,60分鐘。乙醇四唑鹽還原3討論酶的孵育液:0.1MPBS(p7.4)10ml,AD+60mg,45%乙醇3ml,nT6ml,蒸餾水1ml,PMS3ADH是乙醇代謝通路上的重要酶類之一,它主mg。(6)用蒸餾水沖洗。(7)用甘油膠封固。(8)對照要氧化乙醇成乙醛,乙醛又在乙醛脫氫酶作用下生成實(shí)驗(yàn):在孵育液中,不加乙醇或n-丁醇,而用蒸餾水代乙酸最后代謝成二氧化碳和水目前已發(fā)現(xiàn)的ADH替。光鏡下通過觀察反應(yīng)產(chǎn)物沉淀密度的變化來反映有7個基因型,表現(xiàn)型分為5類。ADH主要為aBy、各組之間ADH的活性變化;并用 LUZXCF灰度圖像亞單位組成二聚體,分布廣泛主要分布于胃腸分析儀(日本產(chǎn))測定ADH的灰度值,進(jìn)行指標(biāo)量化。和肝臟內(nèi)。胃DH主要包括3類即類、類、Ⅳ類1.3統(tǒng)計學(xué)處理:結(jié)果經(jīng)計算機(jī)SAS6.11統(tǒng)計軟件ADH5在1985年, Julknmen等6發(fā)現(xiàn)靜脈給予和進(jìn)行方差分析和q檢驗(yàn)?？谘弁葦?shù)量的乙醇后其血乙醇和乙酸水平是不同的。他們發(fā)現(xiàn)靜脈給乙醇組的血乙醇水平明顯高于2結(jié)果服組的血乙醇水平;而且血乙酸即乙醇代謝產(chǎn)物的水平在口服給予乙醇者比靜脈給予乙醇者明顯升高。由2.1胃組織病理學(xué)改變光鏡下模型組與對照組此推論:乙醇部分容量沒有進(jìn)入全身循環(huán),而在胃腸道HE染色結(jié)果對比可見胃粘膜層細(xì)胞(包括主細(xì)胞和代謝,這種部分乙醇在胃腸內(nèi)的代謝叫乙醇首過代謝壁細(xì)胞)水腫變性;且4、8、12周末,模型組主細(xì)胞和壁First pass metabolism,fm)細(xì)胞水腫變性逐漸加重。停止灌注乙醇后1月模型組乙醇FPM可調(diào)節(jié)機(jī)體對乙醇的生物利用度,緩胃粘膜層細(xì)胞(包括主細(xì)胞和壁細(xì)胞)恢復(fù)正常。解乙醇對肝臟、腦及機(jī)體其它器官的毒害作用。因此,組織ADH酶組織細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果胃FP的研究引起了學(xué)術(shù)界相當(dāng)大的關(guān)注。 DipadovaADH主要定位于胃粘膜層的壁細(xì)胞和主細(xì)胞,呈紫藍(lán)等7.8報道FPM在餐后比在禁食情況下大得多;FPM色。停止灌注乙醇前各模型組胃ADH活性明顯低于在女性要 Caballeria比男性低。等3報道胃切除病人對照組(P<0.01),并隨乙醇灌注量的增加和灌注時比健康人低近年來胃D在乙醇的FPM中作用間的延長,4周、8周、12周胃粘膜層ADH的活性進(jìn)行倍受人們矚目,認(rèn)為胃ADH在乙醇的FPM中起主要性下降(P<0.05)。停止灌注乙醇后1個月模型組胃作用23。粘膜ADH活性明顯恢復(fù)(P>0.05)。酶組織細(xì)胞化在本實(shí)驗(yàn)中,我們應(yīng)用酶組化方法研究長期灌注學(xué)染色 LUZEX--F灰度值結(jié)果見表1、2乙醇后大鼠的胃ADH活性變化及停止灌注乙醇后的表1停止灌注乙醇前模型組與對照組胃粘膜ADH灰度值胃d活性改變,同時進(jìn)行胃ADH的細(xì)胞定位,及【x士)胃ADH活性變化與胃粘膜病理變化的關(guān)系。研究發(fā)組別ADh(±)現(xiàn)模型組的胃ADH活性較對照組的胃ADH活性明4周對照組5127.1312.70顯下降,并隨乙醇灌注量的增加和灌注時間的延長呈模型組8138.21±8.86進(jìn)行性下降,而停止灌注乙醇后1月胃ADH活性恢8周對照組5127.20±9.08復(fù)正常。這與 Watanabe9的報告一致。提示長期飲模型組8158781酒會降低胃ADH的活性,導(dǎo)致胃乙醇FPM的下降,12周對照組516311.71從而增加了慢性嗜酒者的乙醇生物利用度,加重了乙模型組8170.21±10.06醇對機(jī)體的毒害作用。同時發(fā)現(xiàn)胃ADH反應(yīng)產(chǎn)物主與對照組相比P<0.01,與前期相比P<0.05要沉淀于粘膜層的壁細(xì)胞和主細(xì)胞的胞漿中,說明了160臨床消化病雜2001年第13卷第4期胃ADH主要位于壁細(xì)胞和主細(xì)胞的胞漿中。1995216:216另外,我們對停止灌注乙醇前后大鼠的胃粘膜進(jìn) 3 Caballeria, Freza M. Hemander-manoar. et al. Gesric origin of行了同步HE染色,發(fā)現(xiàn)模型組4周、8周、12周末胃 the first- pass metabolism of ethanol in humans; efft of gastrectomy Gastroenterology, 1989, 97: 1205.粘膜層壁細(xì)胞和主細(xì)胞發(fā)生水腫變性,且隨乙醇灌注4 Toshimitsu. Takume Double staining procedure for histochemi量的增加和灌注時間的延長其程度逐漸加重;而對照 cal localization of alcohol and aldehyde dehydrogenase activities in the組和停止灌注乙醇后1個月的模型組胃粘膜均正常。 mouse liver Acta Histochem Cytochem1923):402這一組織學(xué)結(jié)果提示長期飲酒引起胃粘膜ADH活性 Ralph Erguson DM Gold bery Genetic markers of aloohol abuse下降可能是由于壁細(xì)胞和主細(xì)胞水腫變性引起的。這 Clinical Chimica Acta, 1997,257: 199. 6 Jallunen RJK, Pipedova C, Lieber CS. First pass metabolism of與 5Terryl1提出的乙醇對胃粘膜損害機(jī)制相一致。 barrier against the systenie toxicity c由于胃ADH在乙醇的FPM中起重要作用,胃粘 ethandl. Life Sei膜AD活性下降導(dǎo)致FPM的下降,從而加大了慢性7 DiPadova Womer TM, Julkunen RJ et al Effects of fasting and嗜酒者的乙醇生物利用度,加重了乙醇對肝臟等器官的負(fù)荷,加速了酒精性肝病等疾病的發(fā)生發(fā)展。因此 Gastroenterology, 1987, 92: 1169. DIPadova C, Freza M, Lieber CS. Castric metabolism of ethand:了解胃粘膜ADH活性變化,誘導(dǎo)ADH的活性,將為 implication for its bionvailability in men and women. In: Biomedical酒精性肝病等疾病的預(yù)防和治療提供新的途徑。 and social aspects of aloohol and albholism, ed. Kuriyama K and Ishi參考文獻(xiàn) H, Elsevie Scienee Publishers BV. Amsterdam,. 1998,115. Shih ]Jy. Chin SL, Chew ww, et al. Human stomech aleohal and 9 Watuanabe M. Immounohiste aldehyde dehydrogenases: comparison ol expre spression pertern and ectivi. ach before and afte of alcohol in alcobolics-using confocal ties in slinentary tract. Gastroenterology. 1997, 112: 766. Hirokazu yokoyama, Enrique barsona. Charles Lierber. Uptreaxm 10 Terry L, Macmath MD. Aloobol and gastrointestinal bleeding. Enmerg structure of human ADH, gene and the organ distribution of its ex20010114收2001041回)缺血性結(jié)腸炎8例診治體會B襄類鐵路醫(yī)院(襄類441003】田新社張松市第一人民醫(yī)院趙文剛本組缺血性結(jié)腸炎8例,男5例,女3例,年齡5873歲,平均62歲。其中高血壓病4例次(下同)腦血栓后遺癥1例冠心病1例尿病3例,習(xí)慣性便秘2例慢性支氣管炎、肺氣腫2例。全部病例均有突發(fā)性腹痛。其中便血6例,發(fā)熱5例,脹3例,心、嘔吐2例。纖維結(jié)腸境檢查結(jié)果:乙狀結(jié)腸粘膜充血、水腫、糜爛3例,結(jié)腸脾曲粘膜充血、水腫、散在淺潰瘍2例,降結(jié)腸粘膜增厚、腸腔狹窄1例,乙狀結(jié)腸粘膜充血、水腫、潰瘍1例,橫結(jié)腸近曲處粘膜散在淺潰瘍1例病變腸段和粘膜主要表現(xiàn)為腸粘膜輕度彌性充血、水腫或散在片狀充血、紅斑及合期潰瘍,血管網(wǎng)仍較模糊不清。病理檢查結(jié)果均為結(jié)腸粘膜非特異性炎癥。后期復(fù)查可見粘膜下含鐵血黃素沉。根據(jù)臨床表現(xiàn)、纖維結(jié)腸鏡檢查和病理檢查結(jié)果,結(jié)合基礎(chǔ)疾病并排除上消化道出血、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸克隆氏病、腸結(jié)核、大腸癌、慢性結(jié)腸炎等疾病而確定診斷治療:(1)擴(kuò)管治療:靜脈點(diǎn)滴復(fù)方丹參、黃芪等,口服消心痛、腸溶阿斯匹林等7~14天。停用縮血管藥物。(2)全身應(yīng)用廣譜抗生素,以預(yù)防和減輕腸道繼發(fā)性細(xì)菌感染,減少細(xì)菌毒米產(chǎn)生,輕內(nèi)毒米血癥。(3)下消化道出血明顯者于結(jié)腸鏡檢查時給予凝血酶1000~2000u局部噴灑止血,另外口服凝血酶500~1000u,tid,口服思密達(dá)等腸粘膜保護(hù)劑結(jié)果8例經(jīng)纖維結(jié)腸鏡檢在、病理檢查確診為非壞痘型患者,全部痊愈。缺血性結(jié)腸炎可分為壞痘型和非壞疽型兩型。壞型為不可逆性腸管缺血、壞死,全身中毒癥狀重,有腹膜炎體征,死亡高,應(yīng)盡早剖腹手術(shù),切除病變腸段。(2000222收精