來源：藥研習

內(nèi)容提要：

一、FDA在新藥申報現(xiàn)場審計及其他GMP審計中發(fā)現(xiàn)的實驗室控制缺陷：

二、實驗室檢驗超標事件（ OOS）調(diào)查程序

三、相關問答

一、FDA在新藥申報現(xiàn)場審計及其他GMP審計中，發(fā)現(xiàn)的主要實驗室控制缺陷：

1、沒有建立科學可靠和適當?shù)臉藴?，以確保藥物符合鑒別、含量、質(zhì)量及純度標準。

2、沒有驗證分析方法的準確度、靈敏度、專屬性和重現(xiàn)性等。新藥申報中的分析方法必須進行驗證并有相關文件記錄驗證結(jié)果。

3、建立的規(guī)范、標準、取樣計劃、測試程序或?qū)嶒炇铱刂瞥绦驔]有被很好的執(zhí)行或在執(zhí)行時沒有記錄。

一種情況是企業(yè)在執(zhí)行的過程中使用已申報的測試方法沒有達到預期的結(jié)果，于是重新更改了這個方法，但沒有重新申報。另一種情況是分析員在做實驗的時候自己做了變化而沒有任何紀錄。

4、沒有按照已經(jīng)制定的書面程序中所規(guī)定的合適頻率對儀器進行較正，或當儀器準確度或精確度超標時，沒有采取適當?shù)募m正措施。如果儀器校正的結(jié)果超標，非常重要的一步就是要調(diào)查用這個儀器測試的產(chǎn)品會不會存在質(zhì)量的隱患，會不會有不準確的結(jié)果。

5、對于質(zhì)量控制部門的職責或程序沒有成文，或者沒有被執(zhí)行。典型的質(zhì)量控制部門的職責就是批準標準、程序，并對任何異常事件進行調(diào)查。

6、在不合格批調(diào)查方面，對預料之外的偏差/ 某些批次產(chǎn)品或其組分不符合標準的情況的調(diào)查沒有覆蓋與該異常事件相關的同一產(chǎn)品的其它批次或其他品種。即使結(jié)果認可被拒絕，對超標事件進行調(diào)查還是很有價值的，可以判斷是不是影響到其它的相關批次。

如果結(jié)果超標了，就要確定它的根本原因。這個原因有助于評價相關批次，即使這些相關批次結(jié)果都是在這個標準范圍之內(nèi)，但還是得重新評價結(jié)果是否可信。

7、藥品出廠前的測試和釋放沒有適當?shù)膶嶒炇遗卸ǔ绦?，以確保藥品能最終滿足產(chǎn)品質(zhì)量標準。

二、實驗室檢驗超標事件（ OOS）調(diào)查程序

雖然FDA 一直在強調(diào)實驗室超標情況調(diào)查的問題，但是在這個問題上還是有很多缺陷項目。FDA對此問題的警告信主要是因為企業(yè)出現(xiàn)了超標事件以后沒有通過調(diào)查找到超標的根本原因而否定了該結(jié)果，而且報告時選擇性地挑選數(shù)據(jù)，而不是把完整實際的結(jié)果報告出來。

必須對實驗室異常事件或超標結(jié)果進行調(diào)查以確定其原因。調(diào)查行為應以書面形式如調(diào)查報告進行記錄。理想的報告應該是包括完整的調(diào)查，如結(jié)論、預防和整改措施，以防事件再次發(fā)生。因此要求企業(yè)的實驗室都要有完整的OOS調(diào)查程序，包括如何調(diào)查超標結(jié)果以及如何拒絕超標結(jié)果。

實驗室超標結(jié)果的定義是產(chǎn)品質(zhì)量指標測試中超出已經(jīng)建立的可接受標準的單個或一系列結(jié)果。任何一個實驗室必須要有一個批準的程序來對實驗室超標結(jié)果進行調(diào)查。在丟掉這個實驗溶液之前要進行初始調(diào)查來評估數(shù)據(jù)的準確性。具體調(diào)查內(nèi)容包括回顧程序、設備、人員、操作過程以及任何文件記錄和測試的證據(jù)（如移液管、燒瓶等等），也就是實驗所用到的東西都要放在原處，不要毀壞這些證據(jù)。

1、對程序進行調(diào)查的時候要確認測試程序得以正確執(zhí)行；確認用到的試劑和標準品的配制都是正確的，并且是在有效期以內(nèi)；確認樣品的稱量、測試量和稀釋度都是準確的；確認測試方法通過驗證并得到執(zhí)行。

2、對于設備的調(diào)查就是要檢查設備是否工作正常，是否在校正期限以內(nèi)。這要通過檢查設備校正紀錄來檢查維護保養(yǎng)是不是按照設定的程序在做，是不是每天在校準。然后檢查系統(tǒng)的適用性、選擇性、靈敏度、重復性等等。

3、對樣品完整性進行測試，要確認測試的時效性，樣品時間是不是在規(guī)定儲存樣品期限以內(nèi)，還有樣品的儲存條件即樣品是不是對光敏感，或是對濕敏感，或是有一定時間要求，時間放長了是否會變性。檢查樣品配制的方法是否適當。還有對照品的檢查應包括對照品是不是在規(guī)定的有效時間內(nèi)，對照品本身純度是不是標示的純度以及儲存的情況。還有就是儲備液通常準備得比較早，這會不會超過存放時間。最后是分析人員培訓的問題。

經(jīng)過初步調(diào)查，回顧了所用的程序、設備、人員等等。初始調(diào)查做出的假設結(jié)論可以通過原樣品溶液重新進樣來判斷。例如：重新進樣能提供強有力的證據(jù)證明是否是儀器而不是樣品或制樣過程導致了問題的發(fā)生。舉個例子如果標準品的純度是有問題的，就可以再用新的標準品來測定原液，從而得到一個有效結(jié)果。再舉個例子如果結(jié)果是HPLC操作的問題，就可以用原液重新進樣來判定當初得到的是一個無效結(jié)果，從而否定樣品超標的結(jié)果?；蛘甙l(fā)現(xiàn)使用的容量瓶是錯誤的，如果使用100ml 的容量瓶但實際上應該使用125ml的容量瓶，這個結(jié)果很顯然就要被拒絕。

對制劑進行進一步的成分提取能夠確定原分析過程中是否已經(jīng)完全提取了該制劑單位中的有效成分（以供測試）。不完全的提取會導致測試結(jié)果無效。如果在提取過程中發(fā)現(xiàn)有更多成分提取出來，那么原來結(jié)果顯然要被拒絕。

有明顯證據(jù)表明存在實驗室錯誤時，原測試結(jié)果應作為無效結(jié)果處理。沒有明顯證據(jù)表明存在實驗室錯誤時，應按照已建立的調(diào)查程序展開全方位調(diào)查，以確定引起預料外結(jié)果的原因。

如果這樣的初步調(diào)查沒有發(fā)現(xiàn)明顯的實驗室錯誤，那么按照每一個企業(yè)自己的調(diào)查程序進行全面調(diào)查來確定這個結(jié)果。實驗室調(diào)查階段常用方法：

1) 從原來取的樣品中再取一個部分進行重新測試。

2) 在這個批次里面重新取樣再進行測試

3) 用統(tǒng)計學的方法進行離群值的檢驗。

重新測試前應起草針對該特定異常事件/ 結(jié)果超標事件的測試方案并得到批準，以便根據(jù)這個結(jié)果能判斷是否合格。這個方案要事先定好，不能等結(jié)果出來之后再討論。

一個重新測試的方案應包括以下內(nèi)容：進行調(diào)查性測試或重新測試的有效理由；合適的審批程序；對樣品（包括其重復制樣）進行的測試次數(shù)；預先設定的可接受標準；指定的測試執(zhí)行人員。

重新測試應使用和原樣品同源的樣品，應在科學可靠的判斷基礎上作出重新測試的決定。通常不建議由原來的測試人員來進行重新測試，最好能更換檢驗員。

允許進行重新測試的情況包括調(diào)查發(fā)現(xiàn)設備故障導致了OOS和調(diào)查發(fā)現(xiàn)樣品配制/ 稀釋問題導致了OOS兩種。如果調(diào)查發(fā)現(xiàn)是樣品的配置和稀釋的問題，那么通過重新測試原來的樣品就可以判定超標的結(jié)果是一個離群值，結(jié)果可以被拒絕。

重新取樣的概念包括對取自該批產(chǎn)品的新樣本進行的分析。如果調(diào)查結(jié)果表明原測試樣品不能代表該批產(chǎn)品質(zhì)量，則應重新取樣進行測試。

對結(jié)果進行平均會掩蓋各單獨結(jié)果之間的差異，因此除非方法或程序要求只取平均值，所有的單個結(jié)果均應反映在報告中。舉個例子如果得到60 個結(jié)果，里面只有一到兩個是超標的，而且超標結(jié)果是被證實的，但是取平均值的時候就被掩蓋了。對結(jié)果進行平均不適用于粉末混和、混合均勻度和含量均勻度的測試，通常希望通過均勻度的測試來反映不同部位取樣有一定的均勻性，但取平均值的時候容易掩蓋均勻性。當缺乏文件記錄證明存在分析錯誤時，合格結(jié)果并不具有比超標結(jié)果更高的可信度。在對含量測定的結(jié)果進行平均時，所有單個結(jié)果必須符合標準。

對實驗室結(jié)果超標事件進行離群值檢驗時，應預先確定可能進行的離群值檢驗，并在相關的數(shù)據(jù)解釋SOP中明確規(guī)定。程序中應規(guī)定取得統(tǒng)計意義所需的結(jié)果數(shù)量。離群值檢驗適用于具有高波動性的含量測試，例如生物制劑含量測試。離群值檢驗不適用于波動相對較小的化學測試。離群值檢驗不適用于溶出度測試或均勻度測試等評估產(chǎn)品質(zhì)量波動性的測試。

對實驗室結(jié)果超標事件調(diào)查作出結(jié)論：若調(diào)查揭示的原因清楚地表明實驗室存在缺陷，則測試結(jié)果無效；若調(diào)查表明引起OOS結(jié)果的因素會影響批次產(chǎn)品的質(zhì)量，并且確認OOS結(jié)果有效，則可認為該批次產(chǎn)品沒有達到質(zhì)量標準而不得被釋放；對于無結(jié)論的調(diào)查沒有揭示出超標的原因，也不能確認超標的結(jié)果到底是不是有效，那么就要在批次記錄中應當保留原測試結(jié)果，并在決定是否釋放該批次產(chǎn)品時進行全盤考慮。

若異常事件/ 超標結(jié)果不能歸因于實驗室，則調(diào)查應擴展至生產(chǎn)區(qū)域。對所有確認的有效的超標結(jié)果均要求進行生產(chǎn)過程調(diào)查。

三、相關問答

1、在初始調(diào)查中無法找到實驗室結(jié)果超標事件的根本原因，希望能介紹一些實用的方法以助于調(diào)查。

在實驗操作過程中要確保所做的每一步都留下證據(jù)，這樣在出現(xiàn)實驗室結(jié)果超標事件時方便調(diào)查。

比如在實驗過程中保留好所有移液管、容量瓶，這樣就可以方便確認是否有錯誤使用。但在很多情況下查找根本原因很困難，但是通過多次取樣，而且取樣的量比較多，能保證它有代表性及符合均一度的要求。多次取樣的結(jié)果如果是好的，也可以說明當時的結(jié)果不對。通過標準品的反映上來看，如果標準品的峰值和以前測試的過程中標準品的反映有很大不同也可以判斷標準品有問題。

2、對于GC, HPLC適應性測試， FDA有什么具體要求？

與USP描述的相同， FDA要求測試拖尾因子、理論塔板數(shù)等等。FDA對HPLC重復性試驗的進樣要求是進5 針標準品，計算RSD， RSD應符合相應的要求。

3、實驗室里常用儀器如IR 、HPLC、GC、UV等的校正頻率？

正規(guī)的儀器校正一般可能一年兩次或一年一次， HPLC每年做一次完整的校正，但是天平每季度做一次。校驗的頻率有時要更頻繁， 比如UV要每個月做一次校驗， 使用標準溶液對照。

但校正還是要每年一次或兩年一次，這要根據(jù)系統(tǒng)的運行情況和以前的歷史數(shù)據(jù)來進行調(diào)整。也可以根據(jù)儀器的使用頻率，儀器本身是天天在使用還是一個月只用一次，這些具體情況都不一樣。根據(jù)上述情況可以制定校驗程序，但一旦制定就必須執(zhí)行。對校正頻率沒有嚴格的要求，要看儀器的歷史數(shù)據(jù)及這臺儀器本身是否穩(wěn)定。

如果校正過程中出現(xiàn)OOS超標，就要進行調(diào)查，可能要適當增加校正頻率，同時要分析判斷這臺儀器所測試的產(chǎn)品有沒有影響。

4、含量測定中USP要求UV測試，但效果不好， HPLC 能不能替代UV？

USP里有一個章節(jié)介紹做分析方法的對照， 自己制定可以證明HPLC和UV的結(jié)果一致的方案，如果驗證方案結(jié)果能確定這一點也可以使用HPLC的方法。如果能證明兩個方法是等同的，其實企業(yè)內(nèi)部可以用HPLC進行內(nèi)部釋放及內(nèi)部控制。但是產(chǎn)品出口的時候，對方測試方法一定是用USP上的方法來確認產(chǎn)品是否合格。

5、是否要考察工作標準品的穩(wěn)定性？

工作標準品的穩(wěn)定性是要進行考察，要制定程序定期考察這個工作標準品是否保持這個純度。

6、工作標準品的制備有哪些方面的要求？

制備標準品主要由產(chǎn)品本身的性質(zhì)來決定，沒有一個通用的方法，但FDA 要求工作標準品要達到一定的濃度。

7、實驗室對樣品的流轉(zhuǎn)如何進行控制？

樣品進入實驗室以后通常應有一個固定的地方來存放樣品，然后在收樣登記單上記錄送樣人及收樣人。在大的實驗室通常會使用實驗室信息管理系統(tǒng)，通過這個系統(tǒng)能很清楚地記錄樣品在實驗室里整個流程管理。

8、FDA檢查中發(fā)現(xiàn)企業(yè)的HPLC條件中，流動相比例發(fā)生變化，是否在變更前應先備案？

流動相的變化可能影響兩個方面：一個就是有效成分和降解成分的分離度發(fā)生變化；另外就是保留時間發(fā)生變化，通?？赡茉试S有10%的變動。但是如果流動相比例變化使HPLC的圖譜都發(fā)生了很大的變化，就需要申報。如果變化不是很大，能確保分離度和保留時間與原來基本差不多，就沒問題。因此企業(yè)要先評估這一點。

9、介紹中提到的“ OOS 的重新測試不應由原測試人員進行”是基于什么考慮的？

平時操作中認為還是由原測試人員重測比較好（重現(xiàn)性較好），除非原測試人員有操作不當或失誤。

重測的目的主要不是證明實驗人員之間差異的問題，而是證明實驗結(jié)果是不是超標。通過另外一個人來做實驗也可以看出這個實驗人員的培訓情況和操作情況。特別需要找某方面原因的時候可以由同一個測試人員來做，這主要依據(jù)調(diào)查的內(nèi)容和調(diào)查的原因。

10、如果實驗室OOS調(diào)查無結(jié)果，而且生產(chǎn)過程的調(diào)查也未發(fā)現(xiàn)異常，這批藥品如何處理？

這可能會有不同情況，如果不能得出結(jié)論，就需要重新測試。如果重新測試的結(jié)果超標，那么這批藥品肯定要被拒絕。如果開始的時候超標，但是能證明后面結(jié)果是好的，這批產(chǎn)品也可以被接受。有時候根本原因找不到，結(jié)果也可以被 接受。