WB 又被污染了？這一份祖?zhèn)鞯娜ノ蹖毜湔埵障?/h1>
時間：2023-03-01
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WB 又被污染了？這一份祖?zhèn)鞯娜ノ蹖毜湔埵障?/h4>
生物學(xué)霸
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ShengWuXueBa
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明明都是按照實驗步驟勤勤懇懇做下去，為什么 western blot一出結(jié)果就翻車？
第一反應(yīng)就是投訴抗體公司？抗體表示很委屈。小編當(dāng)年就是在 WB 的歷練下從小白蛻變到實驗高手，回看就是滿滿的血淚史……
先淺淺的介紹一下今天的主角
——
蛋白質(zhì)免疫印跡
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在篩選 WB 圖時，是否時常發(fā)現(xiàn)一些奇奇怪怪的結(jié)果？其中實驗中各種造成的污染是這些「怪圖」產(chǎn)生的一大原因！
1. 試劑污染
結(jié)果：
可能導(dǎo)致抗體結(jié)合到封閉劑，出現(xiàn)黑點或者黑斑
解決：
使用短時間內(nèi)配置的試劑；過濾封閉液；選用其他類型的封閉液
2. 抗體污染
結(jié)果：
出現(xiàn)非特異性條帶
解決：
更換出現(xiàn)問題的一抗或者二抗；或者適當(dāng)延長洗滌時間，或增加洗滌次數(shù)
3. 細(xì)胞污染
結(jié)果：
細(xì)胞樣品的交叉污染、分化和傳代次數(shù)過多，都會使蛋白的表達(dá)譜發(fā)生變化而出現(xiàn)雜帶
解決：
篩選細(xì)胞來源（拒絕來路不明細(xì)胞）；規(guī)范細(xì)胞傳代的各個步驟，避免細(xì)胞交叉感染；控制細(xì)胞的傳代次數(shù)，不同細(xì)胞傳代次數(shù)上限不定
4. 操作污染
結(jié)果：
出現(xiàn)非均一性的背景
解決：
復(fù)盤出現(xiàn)可能出現(xiàn)問題的那一環(huán)節(jié)，重做
5.細(xì)菌污染
結(jié)果：
凝膠染色不均勻
解決：
4℃ 保存抗體并使用新鮮的緩沖液浸泡凝膠；確保在振蕩孵育時抗體充分浸沒膜。
6.緩沖液污染
結(jié)果：
導(dǎo)致圖片出現(xiàn)高背景
解決：
使用新的緩沖液，過濾緩沖液
當(dāng)然，除了 WB 污染問題，丁香實驗小程序上面還有很多學(xué)長學(xué)姐分享的 WB 經(jīng)驗貼：
「道理都懂，但還是很難完美完成每個實驗」
理想和現(xiàn)實之間總是有些差距，這次不行，靜待下次，主要是要學(xué)會分辨錯誤原因，每次解決一點點。
當(dāng)然有問題可以進(jìn)入丁香實驗小程序，搜索相關(guān)內(nèi)容，提前了解實驗之「坑」。還能向?qū)W長學(xué)姐提問，讓他們來為你支招～
點擊進(jìn)入丁香實驗小程序
實驗問題在線問，學(xué)長學(xué)姐在線答
策劃｜蛋黃
排版
｜77
圖片｜丁香實驗設(shè)計團(tuán)隊
ShengWuXueBa
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1. 試劑污染
結(jié)果： 可能導(dǎo)致抗體結(jié)合到封閉劑，出現(xiàn)黑點或者黑斑
解決： 使用短時間內(nèi)配置的試劑；過濾封閉液；選用其他類型的封閉液
2. 抗體污染
結(jié)果： 出現(xiàn)非特異性條帶
解決： 更換出現(xiàn)問題的一抗或者二抗；或者適當(dāng)延長洗滌時間，或增加洗滌次數(shù)
3. 細(xì)胞污染
結(jié)果： 細(xì)胞樣品的交叉污染、分化和傳代次數(shù)過多，都會使蛋白的表達(dá)譜發(fā)生變化而出現(xiàn)雜帶
解決： 篩選細(xì)胞來源（拒絕來路不明細(xì)胞）；規(guī)范細(xì)胞傳代的各個步驟，避免細(xì)胞交叉感染；控制細(xì)胞的傳代次數(shù)，不同細(xì)胞傳代次數(shù)上限不定
4. 操作污染
結(jié)果： 出現(xiàn)非均一性的背景
解決： 復(fù)盤出現(xiàn)可能出現(xiàn)問題的那一環(huán)節(jié)，重做
5.細(xì)菌污染
結(jié)果： 凝膠染色不均勻
解決： 4℃ 保存抗體并使用新鮮的緩沖液浸泡凝膠；確保在振蕩孵育時抗體充分浸沒膜。
6.緩沖液污染
結(jié)果： 導(dǎo)致圖片出現(xiàn)高背景
解決： 使用新的緩沖液，過濾緩沖液
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「道理都懂，但還是很難完美完成每個實驗」
理想和現(xiàn)實之間總是有些差距，這次不行，靜待下次，主要是要學(xué)會分辨錯誤原因，每次解決一點點。
當(dāng)然有問題可以進(jìn)入丁香實驗小程序，搜索相關(guān)內(nèi)容，提前了解實驗之「坑」。還能向?qū)W長學(xué)姐提問，讓他們來為你支招～
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策劃｜蛋黃
排版 ｜77
圖片｜丁香實驗設(shè)計團(tuán)隊