盤點(diǎn)!3 種樣本蛋白質(zhì)提取方式
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(本專題合作專家)
各組織提蛋白
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
蛋白質(zhì)保存
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
在辛辛苦苦提取到蛋白后,不免會(huì)面臨另一個(gè)問(wèn)題:如何儲(chǔ)存蛋白呢?
首先,儲(chǔ)存方法的選擇取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用蛋白質(zhì)的時(shí)間和用途。儲(chǔ)存時(shí)需要避免接近蛋白質(zhì)穩(wěn)定極限的儲(chǔ)存條件(例如極端 pH 或者接近蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的 pH)。
保存方法:
1. 短期保存(24 小時(shí)內(nèi)):大多數(shù)的蛋白質(zhì)可以保存在 4°C。
2. 在 4°C 超過(guò) 24 小時(shí)需要考慮對(duì)蛋白樣品滅菌過(guò)濾(使用 0.22 μm 過(guò)濾器),或者加入抑菌劑(例如 0.1% 疊氮化鈉)以避免細(xì)菌生長(zhǎng)。值得注意的是,并非所有蛋白質(zhì)都能在 4°C 長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定。
3. 長(zhǎng)期保存(一周以上)需要將蛋白樣品凍存。使用液氮或者干冰/乙醇混合物將其快速冷凍避免蛋白質(zhì)變性。可以將樣品分裝至多個(gè)管子中,來(lái)避免反復(fù)凍融可能造成的活性降低或影響結(jié)構(gòu)。
4. 保存幾個(gè)月:可以將其保存在-20°C,并加入 50% 甘油避免凍住。
5. 保存幾個(gè)月至幾年:此時(shí)應(yīng)把樣品在-80°C 或液氮中冷凍。在這種溫度下,加甘油就沒(méi)那么有必要了,但加 5~50% 的甘油可以幫助保持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。
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