實驗室生物安全培訓微生物I病毒I細菌I病原體對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。Laboratory biosafety 目錄1.病源微生物與危險品管理2.實驗室生物安全危害3.實驗室生物安全防護4.實驗室生物安全基本操作規(guī)程5.實驗室手衛(wèi)生contents病源微生物與危險品管理第一部分對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。生物危害程度的分級根據(jù)對個體和群體的危害性分四級：Ⅰ級指危害性最低的病毒、細菌、真菌和寄生蟲等生物因子；Ⅱ級指中等危害的生物因子，多為條件致病菌或機會致病菌；Ⅲ級指能引起個體的嚴重感染，但不易在人群中傳播擴散的生物因子；可用抗生素治療Ⅳ級指能引起個體和群體嚴重感染，難治療根據(jù)以上實際情況，臨床微生物實驗室及免疫學病原體篩檢的防護標準應該是生物危害程度的分級危險物品共分為九大類第1類 爆炸品 第2類 氣體 第3類 易燃液體 第4類 易燃固體 第5類 氧化劑和有機過氧化物 第6類 毒害品和感染性物質(zhì) 第7類 放射性物品 第8類 腐蝕品 第9類 雜項危險品實驗室生物安全危害第二部分對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。相關(guān)文獻報道：對3921例實驗室相關(guān)感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，已知原因的實驗室感染只占全部感染的18％，不明原因的實驗室感染卻高達82％。對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。氣溶膠與實驗室感染氣溶膠的特點生物氣溶膠無色無味、無孔不入，不易發(fā)現(xiàn)，實驗人員在自然呼吸中不知不覺吸入而造成感染。若治療控制不及時會造成嚴重后果。 呼吸道傳播的傳染病的微生物特別是高致病性病毒常常發(fā)生變異，尤其是其抗原性、致病性都可能發(fā)生改變，在空氣中存活力增強。 可以遠距離或較遠距離傳播，這是其與其他傳播途徑的顯著區(qū)別，也是氣溶膠傳播難以預防的另一重要原因。氣溶膠與實驗室感染可產(chǎn)生各種嚴重程度微生物氣溶膠的實驗室操作 氣溶膠與實驗室感染微生物氣溶膠的控制實驗室空氣傳播與感染主要有三個過程：因此，要控制或減少實驗室空氣傳播和感染，要有相應得生物安全措施，以控制實驗室微生物氣溶膠感染的三個過程。各種產(chǎn)生感染性氣溶膠的操作盡量在生物安全柜內(nèi)操作。正確使用生物安全柜，以有效地減少實驗室獲得性感染和由于氣溶膠暴露而導致的培養(yǎng)物的交叉感染，并能保護環(huán)境。使用生物安全柜微生物氣溶膠的控制規(guī)范和改進操作過程和操作技術(shù)，盡量避免操作失誤。 例如：用冷卻接種環(huán)沾取菌液進行接種------氣溶膠減少效果可達91%。氣溶膠與實驗室感染安全操作實驗室生物安全防護第三部分對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。（一）不同生物安全等級實驗室的介紹（二）安全防護的基本要求在實驗室工作時，必須穿著合適的工作服或防護服。 在進行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料的操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。 在處理完感染性實驗材料后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。 為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設備。 嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室工作區(qū)域。 不得在實驗室內(nèi)穿露腳趾的鞋。 禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。 禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。 在實驗室內(nèi)用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。（三）防護設備設施生物安全柜壓力蒸汽滅菌器可移動紫外燈紅外加熱滅菌器酒精燈洗眼沖淋裝置主要的保護屏障，防止生物有害氣溶膠逃逸. 保護操作人員-負壓 保護周邊環(huán)境-HEPA 可以保護樣品-層流（三）防護設備設施生物安全柜實驗室操作都可能產(chǎn)生感染性氣溶膠。 直徑小于5μm的氣溶膠、直徑為5～100μm的微小液滴亦可能產(chǎn)生吸入或交叉污染工作臺面的其他材料。 正確使用生物安全柜—將有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實驗室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。（三）防護設備設施CLASS II 二級生物安全柜CLASSII級生物安全柜適用于1、2、3級生物安全水平的實驗。它們可以安全的保護樣品、人員和環(huán)境。CLASS II 級生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流分配的不同，主要是外排氣流，分為：A型（30%排在實驗室內(nèi) ） B型 B1 （70%接管道外排） B2 （100%接管道外排） B3 （30% 接管道外排） HEPA（高效微粒子空氣，能99.99%地去除0.3微米以上顆粒（三）防護設備設施在生物安全柜上工作擺放原則在工作臺面上的實驗操作應該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進行 操作要點避免使用明火，用適當?shù)臏缇胧?避免使用干擾安全柜內(nèi)層流的實驗手段 如使用中有遺灑，所有物品被拿走前必須經(jīng)去污染處理 安全柜必須處于操作狀態(tài)時，才能徹底消毒內(nèi)壁禁用明火使用明火會對氣流產(chǎn)生影響 特別在處理揮發(fā)性物品和易燃物品時，也易造成危險 在對接種環(huán)進行滅菌時，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應使用明火。 （三）防護設備設施淋浴裝置和應急消毒噴淋裝置管理規(guī)定BSL-2實驗室在必要時應有應急噴淋裝置。 BSL-3實驗室應設置淋浴裝置（清潔區(qū)），必要時在半污染區(qū) 設置應急消毒噴淋裝置。管理要求保持管道的通暢、必須告知工作人員應急消毒。 噴淋裝置的擺放位置、培訓其操作方法。 應急消毒噴淋裝置 。 在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗時間至少需要20分鐘。如果為化學物品濺出污染，用大量急水沖洗。 當使用緊急淋浴裝置后必須立刻填寫事故報告單并立即報告主管領(lǐng)導 。（三）防護設備設施個體防護的配備原則BSL－1實驗室生物安全實驗室一般使用乳膠橡膠或聚腈類或聚氯乙烯手套用于對強酸、強堿、有機溶劑和生物危害物質(zhì)的防護 。BSL－2實驗室在實驗室中應穿著工作服或罩衫等防護服。離開實驗室時，防護服必須脫下并留在實驗室內(nèi)。不得穿著外出。用過的工作服應先消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。 當手可能接觸感染材料、污染的表面或設備時應戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室。工作完全結(jié)束后方可除去手套。 一次性手套不得清洗和再次使用。 除符合BSL－1的要求外，還應該符合下列條件：一般情況下，佩戴一副手套即可（BSL-1實驗室） 若在生物安全柜中操作感染性物質(zhì)時（BSL-2和BSL-3實驗室）應該佩戴兩副手套。 在操作過程中，外層手套被污染，立即用消毒劑噴灑手套并脫下后丟棄在生物安全柜中的高壓滅菌袋中并立即戴上新手套繼續(xù)實驗。 戴好手套后應完全遮住手及腕部，如必要可覆蓋實驗服袖。（三）防護設備設施正確使用手套1、手套的選擇工作人員在實驗時應穿工作服，戴醫(yī)用口罩。 工作人員手上有皮膚破損或皮疹時應戴手套。 2、手套的檢查在使用手套前應該檢查手套是否退色、穿孔（漏損）或有裂縫?？梢酝ㄟ^充氣試驗，將其浸入水中觀察是否有汽泡來檢查手套的質(zhì)量。3、手套的使用（三）防護設備設施正確使用手套4、手套的清洗和更換使用一次性手套，不可再次使用。用后立即進行 高壓滅菌消毒然后丟棄。 不得戴著手套離開實驗室區(qū)域。戴手套注意要點在實驗室工作中要一直保持戴手套狀態(tài)并選擇正確類型和尺寸的手套； 將手插入手套后將手套口遮蓋實驗服袖;手套的手要遠離面部脫手套過程及注意要點用一手捏起另一近手腕部處的手套外緣,將手套從手上脫下并將手套外表面翻轉(zhuǎn)入內(nèi)； 用戴著手套的手拿住該手套； 用脫去手套的手指插入另一手套腕部處內(nèi)面； 脫下該手套使其內(nèi)面向外并形成一個由兩個手套組成的袋狀； 丟棄在高溫消毒袋中并進行消毒處理。（五）醫(yī)療垃圾處置黃色垃圾袋 醫(yī)療垃圾黑色垃圾袋 生活垃圾紅色垃圾袋 放射性垃圾黃色銳器盒 損傷性垃圾（五）醫(yī)療垃圾處置醫(yī)療廢物分類感 染 性 廢 物病 理 性 廢 物損 傷 性 廢 物藥 物 性 廢 物化 學 性 廢 物（五）醫(yī)療垃圾處置損傷性廢物特征：能夠刺傷或者割傷人體的廢棄的醫(yī)用銳器。 常見： 被病人血液。體液。排泄物污染的物品，包括：棉球、棉簽、引流面條、紗布及其他各種敷料；一次性使用衛(wèi)生用品、一次性使用醫(yī)療用品；一次性醫(yī)療器械；廢棄的被服；其它被病人血液、體液、排泄物污染的物品。 醫(yī)療機構(gòu)收治的隔離傳染病病人或者疑似傳染病病人產(chǎn)生的生活垃圾。 病原體的培養(yǎng)基、標本和菌種保存液。 各種廢棄的醫(yī)學標本。 廢棄的血液、血清。（五）醫(yī)療垃圾處置病理性廢物特征：診療過程中產(chǎn)生的人體廢棄物和醫(yī)學實驗動物尸體等。 常見： 手術(shù)及其它診療過程中產(chǎn)生的廢棄的人體組織、器官等。 醫(yī)學實驗動物的組織、尸體。 病理切片后廢棄的人體組織、病理臘塊等。（五）醫(yī)療垃圾處置感染性廢物特征：攜帶病原微生物具有引發(fā)感染性疾病傳播危險的醫(yī)療廢物。 常見： 醫(yī)用針頭、縫合針。 各類醫(yī)用銳器，包括：解剖刀、手術(shù)刀、備皮刀、手術(shù)鋸等。 載玻片、玻璃試管、玻璃安瓿等。（五）醫(yī)療垃圾處置藥物性廢物特征：過期、淘汰、變質(zhì)或者被污染的廢棄的藥品。 常見： 廢棄的一般性藥物，如：抗生素、非處方類藥品等。 廢棄的細胞毒性藥物和遺傳毒性藥物，包括:致癌性藥物，如環(huán)孢霉素、環(huán)磷酰胺等；可疑致癌性藥物，如:順鉑、絲裂霉素、阿霉素等；免疫抑制劑等。 廢棄的疫苗、血液制品等。（五）醫(yī)療垃圾處置化學性廢物特征：具有毒性、腐蝕性、易燃易爆性的廢棄的化學物品。 常見：醫(yī)學影像室、實驗室廢棄的化學試劑。 廢棄的過氧乙酸、戊二醛等化學消毒劑。 廢棄的汞血壓計、汞溫度計。（五）醫(yī)療垃圾處置醫(yī)療廢物嚴格按照分類分別置于黃色有警示標識的防滲漏、防破裂、防穿孔的專用垃圾袋/盒中，并貼好標簽。醫(yī)療垃圾的收集處置醫(yī)療垃圾由衛(wèi)生員收集，并填寫相應醫(yī)療垃圾收集處置登記本，再由指定的人員轉(zhuǎn)運至醫(yī)院醫(yī)療垃圾儲存處。 微生物培養(yǎng)基、鑒定藥敏卡、菌毒株等醫(yī)療垃圾移交前需進行預處理（高壓滅菌） 血液、血清以及體液等標本移交前需用有效氯2000mg/L的消毒液浸泡30分鐘以上。 針頭、玻片等損傷性垃圾要放入黃色銳器盒中。實驗室生物安全基本操作規(guī)程第四部分對不明原因的實驗室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴散，實驗室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。一、實驗室工作人員的資格和培訓 二、Ⅰ級生物安全防護實驗室安全操作規(guī)程禁止非工作人員進入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負責人批準后方可進入。 接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實驗室前要洗手。 禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。 以移液器吸取液體，禁止口吸。 制定尖銳器具的安全操作規(guī)程。 按照實驗室安全規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生。 每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒。 所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室之前必須進行滅活，如高壓滅活。需運出實驗室滅活的物品必須放在專用密閉容器內(nèi)。 制定有效的防鼠防蟲措施。安全操作規(guī)程四、 Ⅱ級生物安全防護實驗室特殊的安全操作規(guī)程進行感染性實驗時，禁止他人進入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負責人同意后方可進入。免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的工作人員必須經(jīng)實驗室負責人同意方可在實驗室或動物房內(nèi)工作。 實驗室入口處須貼上生物危險標志，注明危險因子、生物安全級別、需要的免疫、負責人姓名和電話、進入實驗室的特殊要求及離開實驗室的程序。 工作人員應接受必要的免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。 并根據(jù)需要定期收集血清樣本，應有檢測報告，如有問題及時處理。 將生物安全程序納入標準操作規(guī)范或生物安全手冊，由實驗室負責人專門保管，工作人員在進入實驗室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作。 工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓，掌握預防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓。安全操作規(guī)程五、樣本運送非高致病性的病原微生物菌（毒）種和生物樣本的運送應由專人負責，專車運送，運送人員應經(jīng)過培訓取得相關(guān)資質(zhì)，不得通過公共交通工具運送，運送過程應采取相應的防護措施。運輸過程中發(fā)生意外狀況，運送單位、運送人、接受機構(gòu)應按國家有關(guān)規(guī)定，采取必要的應急措施。注意事項六、生物安全柜操作注意事項生物安全柜運行正常時才能使用。 生物安全柜在使用中打開的玻璃觀察擋板不能超過規(guī)定高度。 安全柜內(nèi)應盡量少放器材或標本，不能影響后部壓力排風系統(tǒng)的氣流循環(huán)。 安全柜內(nèi)不能使用明火，否則燃燒產(chǎn)生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器。 所有工作必須在工作臺面的中后部進行，并能夠通過玻璃觀察擋板看到。 盡量減少操作者身后的人員活動。 操作者不應反復移出或伸進手臂以免干擾氣流。 不要使實驗記錄本、移液器以及其它物品阻擋空氣格柵 。 在安全柜內(nèi)的工作開始前和結(jié)束后，安全柜的風機應至少運行2～3分鐘。 在生物安全柜內(nèi)操作時，不能進行文字工作。注意事項七、離心機內(nèi)破損樣本的處理若離心時發(fā)生試管破損，應立即關(guān)掉離心機電源開關(guān)，三十分鐘后打開離心機蓋。 如在離心機停止時才發(fā)現(xiàn)試管破損，亦需再關(guān)閉離心機蓋三十分鐘。 必須穿工作服，戴口罩、乳膠手套，小心把破損試管移出離心機，可用鑷子檢起破碎的玻璃。 破裂試管、玻璃碎片、離心機室，必須用75%的酒精消毒，離心機消毒不可用次氯酸鹽溶液，以免造成離心機損壞。 注意事項八、暴露事件的緊急處理 “暴露事件”是實驗室人員在執(zhí)行本職工作時與潛在傳染性物質(zhì)的接觸（眼、嘴、其它黏膜、經(jīng)吸入方式進入呼吸道、破損皮膚、或非腸道）。遭到已知的或潛在暴露事件的工作人員必須按照以下相應暴露事件的處理措施，盡快脫去手套并處理被污染部位。 “暴露事件”的定義用抗菌皂液和溫水沖洗感染部位15分鐘。 必要時進行醫(yī)學處理。1、皮膚感染 用沖眼器沖洗或溫水沖洗感染部位15分鐘。 必要時進行醫(yī)學處理。2、眼、面部飛濺 屏住呼吸迅速離開房間，小心脫去個人防護用品。 當脫去個人防護用品時必須確保個人防護用品暴露面朝里，用皂液和水仔細洗手，實驗室排風（通風）至少1小時。 3、氣溶膠暴露 通知在這一區(qū)域的其他人預防污染。穿戴手套、實驗衣和面罩，用紙巾覆蓋溢出物，把濃縮的消毒劑倒在溢出物區(qū)域周圍并與溢出物混和，并維持適當?shù)慕佑|時間。4、Ⅰ級生物安全實驗室溢出八、暴露事件的緊急處理 迅速離開房間，避免吸入經(jīng)空氣傳播的物質(zhì)。通知其他的人離開。 關(guān)門并貼上警告標簽。 移去污染的衣物，放在生物危害袋內(nèi)。 用肥皂和水清洗所有暴露的皮膚。 報告實驗室生物安全負責人，如果需要幫助，請咨詢生物安全委員會。 在進入實驗室所前，使氣溶膠彌散至少30分鐘。備齊處理物（消毒劑，紙巾，生物危害袋和鑷子）。 穿上防護衣（實驗外套，面罩，實驗手套，必要時穿上長統(tǒng)靴）。按溢出物的狀態(tài)，可以戴一個HEPA過濾呼吸罩以代替外科面罩。 用消毒濕巾覆蓋污染區(qū)域，然后，小心地倒上消毒劑在溢出物的周圍。避免擴大污染區(qū)域。因為要被溢出物稀釋所以要用更濃縮的消毒劑。允許至少20分鐘的接觸反應時間。 用鑷子撿起一些尖銳的物品丟棄在一個尖銳物存放器皿內(nèi)，用消毒劑浸泡。 用消毒劑擦凈溢出物可能飛濺到的周圍區(qū)域。 用消毒劑浸泡溢出物，并放在一個生物危害袋內(nèi)。 用10％家用漂白液噴霧這個區(qū)域和并空氣干燥，或在接觸反應10分鐘后用消毒濕巾擦掉。 用消毒劑或抗菌皂和水清洗手和暴露的皮膚部分。5、II級生物安全實驗室溢出的處理